牛血清中牛腺病毒3型EvaGreen qPCR检测方法的建立

作     者：贺倩 鱼轲 郭敏 李永佳 司璐 刘军 李佳林 魏至栋 HE Qian;YU Ke;GUO Min;LI Yong-jia;SI Lu;LIU Jun;LI Jia-lin;WEI Zhi-dong

作者机构：兰州生物制品研究所有限责任公司疫苗一室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 

出 版 物：《微生物学免疫学进展》 (Progress In Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2022年第50卷第4期

页      码：15-20页

摘      要：目的建立EvaGreen qPCR检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus 3,BAV3)的方法,用于牛血清等牛源材料的检测。方法依据GenBank公布的BAV3标准毒株WBR-1全基因序列,基于E2B区域高度保守序列设计引物,提取并制备DNA标准品,建立EvaGreen qPCR检测BAV3的方法,并对该方法的特异性、灵敏度及精密度进行验证。最后利用该方法检测牛血清中的BAV3,并与细胞培养法及荧光抗体检测对比,以验证该方法的适用性。结果建立的EvaGreen qPCR检测BAV3的方法标准曲线R^(2)>0.99,扩增效率处于90%~110%,可检测范围为0.2×10^(0)~0.2×10copies/μL。实验内Ct值的CV<2.2%,在不同实验间Ct值的CV<1.8%。设计的BAV3引物与牛腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、副流感病毒3型(parainfluenza virus 3,PI3)、呼肠孤病毒(reovirus,REO)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、狂犬病毒(rabies virus,RV)、羊轮状病毒(Lanzhou lamb rotavirus,LLR)基因组均无交叉反应,特异性良好。采用EvaGreen qPCR对198份新生牛血清进行BAV3检测,阳性检出率为10.1%,检出率高于细胞培养法及荧光抗体检测。结论成功建立了EvaGreen qPCR检测BAV3的方法,该方法快速、灵敏、特异、易于标准化,可用于牛血清中BAV3的检测。

主 题 词：外源病毒 牛腺病毒3型 实时定量PCR EvaGreen 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13309/j.cnki.pmi.2022.04.004

馆 藏 号：203114126...