胶原酶消化时间及质量浓度对大鼠胰岛细胞分离的影响

作     者：范宇 石炳毅 钱叶勇 杜源 Fan Yu;Shi Bing-yi;Qian Ye-yong;Du Yuan

作者机构：解放军总医院第二附属医院全军器官移植中心北京市100091 

基　　金："器官移植免疫调节的临床与基础研究"全军"十一五"计划科技攻关课题(06G115)~~ 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2009年第13卷第20期

页      码：3811-3815页

摘      要：背景:胶原酶消化方法是胰岛细胞分离技术中关键的第1步,其成败关系到胰岛细胞移植的存活与功能。目的:针对不同质量浓度和同一质量浓度条件下不同时间点胶原酶分离纯化所获得胰岛细胞的效果进行对比,以确定理想的胶原酶分离胰岛细胞的标准化方案。设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外观察,于2006-09/2007-05在解放军总医院第二附属医院全军器官移植实验室完成。材料:胰岛细胞供体为SD大鼠。将32只大鼠按随机数字表法分为4组,即胶原酶0.5g/L,1.0g/L,1.5g/L及2.0g/L组,每组8只。方法:每组前4只动物,采用0.5,1.0,1.5,2.0g/L4种质量浓度的胶原酶对胰腺进行分离,消化过程中每隔10min为1个时间点,双硫腙染色观察分离情况,分析结果并确定最适合获取胰岛量最多的时间点。随后每组另外4只动物按照确定时间点停止消化,应用间断密度梯度离心法纯化胰岛,双硫腙和丫啶橙-碘丙啶荧光染色分析移植物形态和存活率,确定分离所需胶原酶的最佳浓度。主要观察指标:调整胶原酶的质量浓度与消化时间,荧光显微镜下胰岛细胞计数,评估胶原酶最佳质量浓度及消化时间。结果:分析后确定各组胰岛细胞最佳获取时间,胶原酶0.5g/L组50min,胶原酶1.0g/L组40min,胶原酶1.5g/L及2.0g/L组均为30min。胶原酶0.5g/L组分离并纯化后胰岛细胞收获量显著低于其他3组(P0.05)。胶原酶2.0g/L组胰岛细胞平均存活率显著低于其他3组(P0.05)。结论:在胰腺灌注良好情况下,胶原酶消化条件控制在质量浓度1.5g/L,时间30min进行水浴振荡可获得很好的分离效果。

主 题 词：胶原酶 胰岛细胞 细胞移植 细胞分离 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 08[工学] 1010[医学-医学技术类] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-8225.2009.20.001

馆 藏 号：203114198...