利用CRISPR/Cas9技术构建脂多糖结合蛋白基因敲除小鼠

作     者：李思迪 付彬 郭中坤 林颖杰 张振宇 米传靓 王可洲 LI Sidi;FU Bin;GUO Zhongkun;LIN Yingjie;ZHANG Zhenyu;MI Chuanliang;WANG Kezhou

作者机构：山东第一医科大学(山东省医学科学院)实验动物学院(省实验动物中心)济南250002 山东第一医科大学附属皮肤病医院(山东省皮肤病医院)山东省皮肤病性病防治研究所济南250022 

出 版 物：《实验动物与比较医学》 (Laboratory Animal and Comparative Medicine)

年 卷 期：2022年第42卷第4期

页      码：294-300页

摘      要：目的利用成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白核酸酶9(CRISPR-associated nuclease 9,Cas9)基因编辑技术构建稳定遗传的脂多糖结合蛋白(lipopolysaccaride binding protein,Lbp)基因敲除小鼠。方法根据C57BL/6J小鼠的Lbp基因序列特征,设计sgRNA靶点,删除Lbp基因5’-端蛋白编码保守序列并引入移码突变,使编码LBP失活。提取F0、F1、F2、F3代小鼠基因组,PCR鉴定并测序验证Lbp基因敲除效果,RT-PCR测序验证Lbp基因转录水平,蛋白质印迹法验证F2代LBP蛋白表达水平。结果F0代获得5只杂合子敲除小鼠(Lbp^(+/-))、F1代获得3只Lbp+/-小鼠,F2代获得4只Lbp纯合子敲除小鼠(Lbp^(-/-)),F3代获得30只Lbp^(-/-)小鼠。RT-PCR测序表明,Lbp^(-/-)小鼠mRNA缺失244 bp且发生移码突变,导致翻译提前终止。蛋白质印迹证明Lbp^(-/-)小鼠肝脏组织中无LBP蛋白表达。结论通过CRISPR/Cas9技术成功构建可以稳定遗传的Lbp基因敲除小鼠,为后续进一步研究LBP的免疫及其生理作用提供基础。

主 题 词：脂多糖结合蛋白 CRISPR/Cas9技术 稳定遗传 基因敲除小鼠 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071002[071002] 10[医学] 

D　O　I：10.12300/j.issn.1674-5817.2022.002

馆 藏 号：203114325...