乙型流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及验证

作     者：年悬悬 周辉 李军英 张家友 杨晓明 NIAN Xuan-xuan;ZHOU Hui;LI Jun-ying;ZHANG Jia-you;YANG Xiao-ming

作者机构：武汉生物制品研究所有限责任公司湖北武汉430207 国家联合疫苗工程技术研究中心湖北武汉430207 中国生物技术股份有限公司北京100024 

基　　金：国家重大新药创制科技重大专项(2016ZX09106003-008) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2022年第35卷第9期

页      码：1090-1095,1101页

摘      要：目的建立乙型(B/Yamagata和B/Victotria系)流感病毒荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据乙型流感病毒(B/Yamagata和B/Victotria系)血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸(neuraminidase,NA)遗传差异,构建含B/Yamagata系流感病毒HA(120 bp)、NA(122 bp)及含B/Victotria系流感病毒HA(147 bp)和NA(141 bp)目的序列的重组标准品质粒,并设计特异性引物和探针,绘制标准曲线,建立qRTPCR检测方法。验证该方法的灵敏度、特异性和重复性,并利用建立的方法检测不同年份乙型流感病毒疫苗株和临床分离的季节性乙型流感病毒。结果B/Yamagata系病毒(HA和NA序列)获得的标准曲线方程为Y=-3.3701 X+41.061,R^(2)=0.996,B/Victotria病毒(HA和NA序列)获得的标准曲线方程为Y=-3.31885 X+40.952,R^(2)=0.996。该方法具有高度特异性,能够区分乙型流感病毒,对甲型流感病毒(A/H1N1和A/H3N2)均无特异性扩增;灵敏度达每个反应10拷贝/μL。该方法可鉴别2018年乙型流感流行株及在MDCK细胞或鸡胚上传代培养的疫苗株,并进行了病毒载量的定量。结论成功建立了乙型流感病毒qRT-PCR检测方法,各项验证参数均可满足检测要求,为乙型流感病毒感染的早期诊断、定量检测及其流行病学调查提供了可行的技术支持。

主 题 词：乙型流感病毒 荧光定量RT-PCR 血凝素 神经氨酸 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003705

馆 藏 号：203114454...