犬冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作     者：侯凯文 刘婉宁 王金涛 郑家三 HOU Kaiwen;LIU Wanning;WANG Jintao;ZHENG Jiasan

作者机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 

基　　金：黑龙江八一农垦大学三横三纵支持计划项目(TDJH201903) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第18期

页      码：85-88页

摘      要：为了建立犬冠状病毒(CCoV)的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法,试验通过分析比对NCBI下载的犬冠状病毒(CCoV)全基因组序列,在其3′UTR保守区设计一对特异性引物及TaqMan探针,经反应条件优化,建立CCoV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法。利用建立的检测方法检测CCoV标准品,绘制标准曲线,检测建立方法的特异性、敏感性和重复性,并对临床样品进行检测,且与普通RT-PCR检测结果进行比较,计算符合率。结果表明:标准曲线方程为y=3.25x+10.84,相关系数为0.996 4,在2.61×10^(1)~2.61×10^(8)拷贝/μL范围内具有良好的线性关系。除CCoV检测结果为阳性外,犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒和犬副流感病毒检测结果均为阴性;检测下限为2.61×10^(1)拷贝/μL;批间和批内的变异系数均小于2%。建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检出阳性临床样品9份,而普通RT-PCR检出阳性临床样品5份,两种检测方法的符合率为91.66%。说明建立的CCoV TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于犬冠状病毒病的临床检测。

主 题 词：犬冠状病毒 荧光定量RT-PCR 引物 探针 3′UTR基因 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.08.0316

馆 藏 号：203114457...