一种快速简便的伪狂犬病病毒EP0基因RT-qPCR检测方法的构建

作     者：张丽荣 阮可悦 童武 李国新 高飞 单同领 于海 童光志 郑浩 ZHANG Lirong;RUAN Keyue;TONG Wu;LI Guoxin;GAO Fei;SHAN Tongling;YU Hai;TONG Guangzhi;ZHENG Hao

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

基　　金：国家重点研发计划项目(2016YFD0500100) 上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2016)第4-2号) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2022年第30卷第4期

页      码：81-86页

摘      要：伪狂犬病病毒EP0基因编码区与病毒长的潜伏相关转录物(LLT)互补,这干扰了EP0基因表达的定量分析。本研究根据新近证实的EP0剪接体的序列,设计合成一对特异性引物,以GAPDH作为内参,建立一种SYBR Green实时荧光定量PCR检测EP0表达。提取PRV感染细胞的总RNA,分析了DNaseⅠ消化处理、不同反转录引物对检测结果的影响,并且利用该方法检测了EP0基因在感染细胞中的表达特征。结果显示:建立的RT-qPCR溶解曲线单一,且重复性好;PRV基因组DNA不影响RT-qPCR的检测,总RNA不经过DNaseⅠ消化可直接用于EP0的表达检测;随机引物比Oligo(dT)更适合用于反转录,能获得更灵敏的EP0检测结果;EP0基因在感染细胞8 h后表达量达到最高。小鼠三叉神经组织EP0定量检测发现LLT启动子缺失病毒与亲本病毒相比表达量明显降低。上述结果显示,本文成功建立了检测伪狂犬病病毒EP0基因快速简便的方法,为EP0基因的研究提供了有力手段。

主 题 词：伪狂犬病病毒 EP0基因 RT-qPCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.2022.04.020

馆 藏 号：203114479...