PC12细胞SLC6A4基因沉默稳转细胞系的建立及SLC6A4基因沉默对缺氧PC12细胞凋亡的影响

作     者：张冬梅 高迎春 何蕾 陈克明 李文斌 王荣 马慧萍 ZHANG Dongmei;GAO Yingchun;HE Lei;CHEN Keming;LI Wenbin;WANG Rong;MA Huiping

作者机构：中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院药剂科甘肃兰州730050 

基　　金：国家自然科学基金项目(81571847) 军队后勤科研计划项目面上项目(CWH17J010) 军队卫勤保障能力创新与生成专项计划(21WQ045) 

出 版 物：《药学实践与服务》 (Journal of Pharmaceutical Practice and Service)

年 卷 期：2022年第40卷第5期

页      码：389-394,463页

摘      要：目的构建SLC6A4基因RNA干扰(RNAi)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,建立慢病毒介导沉默SLC6A4基因的PC12细胞稳转细胞系,检测SLC6A4基因沉默对缺氧诱导的细胞凋亡的影响。方法设计合成3条针对SLC6A4基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒GV248中,在293T细胞中共转染进行慢病毒包装。转染大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞,荧光显微镜观察GFP荧光,筛选最佳shRNA干扰序列,应用嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株。应用RT-PCR方法检测SLC6A4基因的表达,Western blot方法检测蛋白5-HTT的表达变化,流式细胞术检测沉默SLC6A4基因对缺氧诱导的PC12细胞凋亡的影响。结果成功构建SLC6A4-shRNA慢病毒载体并转染PC12细胞,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞内SLC6A4基因和蛋白表达明显降低(P<0.01),证实慢病毒载体能够有效沉默SLC6A4基因,沉默SLC6A4基因可以逆转缺氧诱导的细胞凋亡。结论通过shRNA慢病毒载体途径可有效沉默PC12细胞SLC6A4基因,沉默SLC6A4基因可以逆转缺氧诱导的细胞凋亡。

主 题 词：慢病毒载体 shRNA RNA干扰 SLC6A4 细胞凋亡 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.12206/j.issn.2097-2024.202205093

馆 藏 号：203114486...