猪miR-22前体上游序列突变的PK15细胞系构建

作     者：丁兆雪 王佳洁 沈中浩 周晓龙 杨松柏 金航峰 赵阿勇 汪涵 DING Zhaoxue;WANG Jiajie;SHEN Zhonghao;ZHOU Xiaolong;YANG Songbai;JIN Hangfeng;ZHAO Ayong;WANG Han

作者机构：浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300 

基　　金：国家自然科学基金(31802030) 浙江农林大学国家级大学生创新创业训练计划(202010341041) 

出 版 物：《浙江农业学报》 (Acta Agriculturae Zhejiangensis)

年 卷 期：2022年第34卷第9期

页      码：1849-1855页

摘      要：猪miR-22前体上游序列片段突变可能对miR-22的表达起到重要调控作用,为进一步探究其功能,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过针对猪miR-22前体上游序列片段设计2个靶标sgRNAs(short guide RNAs),构建重组表达载体pX459-sgRNA1和pX459-sgRNA2;随后将重组质粒转染猪肾上皮细胞系(PK15),经嘌呤霉素初步筛选后,提取基因组DNA,通过PCR及测序鉴定编辑效果;最后,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测编辑前后miR-22相对表达量的变化。结果显示,81个阳性克隆中,共产生6种突变类型,突变率达60.49%;qRT-PCR检测显示,编辑后miR-22的表达量显著下调约50%。本研究成功获得了miR-22前体上游序列突变的猪PK15细胞模型,为今后猪miR-22的功能研究提供了新的可应用研究对象。

主 题 词：猪 微小RNA 突变 CRISPR/Cas9技术 PK15细胞系 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-1524.2022.09.04

馆 藏 号：203114491...