基于CRISPR/Cas9对兔SMN基因外显子1上sgRNA的效率分析

作     者：吴利颜 覃朝彬 任红贺 韩璐 杨燕燕 张宇 李志鹏 刘庆友 崔奎青 Wu Liyan;Qin Chaobin;Ren Honghe;Han Lu;Yang Yanyan;Zhang Yu;Li Zhipeng;Liu Qingyou;Cui Kuiqing

作者机构：广西大学动物科学技术学院南宁530004 

基　　金：国家自然科学基金联合基金重点项目和地区项目(U20A2051和31860638) 广西重点研发计划项目(AB18221120、AB18294046) 广西卓越学者项目(20180315)共同资助 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2022年第41卷第5期

页      码：935-945页

摘      要：脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy, SMA)的致病基因是运动神经元存活(survival of motor neuron,SMN)基因。本研究旨在利用CRISPR/Cas9系统对兔(Oryctolagus cuniculus)SMN基因外显子1上设计的4条sgRNA进行效率分析。采用生物信息学分析SMN基因的cDNA序列,通过PCR技术克隆出其cDNA序列;针对SMN基因外显子1设计4条sgRNA,分别为sgRNA1-1、sgRNA1-2、sgRNA1-3、sgRNA1-4;构建基因敲除载体pX459-sgRNA和双荧光报告载体RGS-sgRNA,共转染至293 T细胞中,24 h后观察荧光基因表达情况,并通过流式细胞仪分析4个sgRNA效率。结果表明,SMN基因CDS区核苷酸序列保守性较高(约80%),cDNA长为888 bp,编码295个氨基酸;荧光检测和流式细胞仪分析可知,外显子1上sgRNA的切割效率由高到低分别为sgRNA1-2 (57.1%)、sgRNA1-3 (42.0%)、sgRNA1-1 (33.5%)、sgRNA1-4 (0.1%)。CRISPR/Cas9基因编辑技术可高效编辑兔子的SMN基因,为构建兔SMA疾病模型奠定基础。

主 题 词：CRISPR/Cas9 兔 SMN基因 基因克隆 sgRNA效率验证 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100204[100204] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13417/j.gab.041.000935

馆 藏 号：203114518...