诺如病毒和轮状病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：安微 郑晶 车颖欣 陈世界 张婧 杨苗 谢礼 林华 AN Wei;ZHENG Jing;CHE Ying-xin;CHEN Shi-jie;ZHANG Jing;YANG Miao;XIE Li;LIN Hua

作者机构：成都海关技术中心四川成都610041 食品安全检测四川省重点实验室四川成都610041 

基　　金：四川省科技厅科技创新创业苗子工程重点项目(2019JDRC0073) 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第58卷第8期

页      码：49-54,58页

摘      要：为了建立一种能同时检测GI型诺如病毒(GI-NV)、GII型诺如病毒(GII-NV)和A群轮状病毒(A-RV)的三重荧光定量PCR检测方法,本试验根据GI-NV和GII-NV的开放阅读框1(Orf1)与开放阅读框2(Orf2)基因之间保守序列、A-RV的非结构蛋白3(Nsp3)基因保守序列,分别设计合成3对特异性引物和3个TaqMan探针,人工合成含有目标序列的基因,制备重组质粒标准品,绘制标准曲线,并对该检测方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。同时通过检测收集的109份动物源食品样品,对建立的方法与商品化试剂盒进行检测比对。结果显示:该方法可以特异性地区分GI-NV、GII-NV和A-RV,而与其他病原无交叉反应;该方法的最低检出限均为1×102 copies/μL的质粒标准品,具有较高的敏感性;组内和组间重复性试验结果显示,变异系数均小于5%,重复性较好;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率为100%。结果表明,本试验建立的检测方法能够快速、准确区分GI-NV、GII-NV和A-RV。

主 题 词：诺如病毒 轮状病毒 三重荧光定量PCR 标准曲线 动物源食品 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203114610...