正交设计优化玉米SSR-PCR反应体系的研究

作     者：王士磊 李玉鹏 高树仁 Wang Shilei;Li Yupeng;Gao Shuren

作者机构：黑龙江八一农垦大学农学院大庆163319 黑龙江农垦双峰农场密山158308 

基　　金：农业部寒地作物生理生态重点开放实验室课题 黑龙江省2008年研究生创新科研资金项目(YJSCX2008-064HLJ) 黑龙江省教育厅科研项目(11521196)资助 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2009年第28卷第1期

页      码：119-122页

摘      要：为建立适宜玉米SSR-PCR的反应体系和扩增程序,利用正交设计L16(45)表,对反应体系的模板DNA、dNTPs、Primers、Taq DNA聚合酶的浓度进行4因素4水平优化筛选和扩增程序的优化,确立了最优反应体系和扩增程序。即在10μL体系中,模板DNA 20 ng,1×PCR buffer,dNTPs62.5 pmol/μL,Primers0.25 pmol/μL,Taq DNA polymerase 0.5U。反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性45s,60℃退火45s,72℃延伸1min,32个循环;72℃延伸5min,4℃保存。使用300对SSR引物对重组近交系的两亲本扩增,筛选出条带清晰,有差异的引物94对,用于基因连锁图谱构建和QTL定位。

主 题 词：玉米 正交设计 SSR—PCR 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.3969/gab.028.000119

馆 藏 号：203114798...