基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价

作     者：姜菲菲 李昊宇 贾慧建 王丹 赵潇颖 王岳峰 周童 孙丽媛 JIANG Feifei;LI Haoyu;JIA Huijian;WANG Dan;ZHAO Xiaoying;WANG Yuefeng;ZHOU Tong;SUN Liyuan

作者机构：北华大学医学技术学院分子生物教研室吉林吉林132013 中国铁路沈阳局集团有限公司吉林疾病预防控制所吉林吉林132001 

基　　金：吉林省科技厅科技发展计划项目(20190304115YY) 吉林省教育厅“十三五”科学技术项目(JJKH20190657KJ) 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2022年第48卷第5期

页      码：1223-1228页

摘      要：目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。结果:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^(-1),纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^(-1)mg·L^(-1);稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。结论:建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。

主 题 词：蜡样芽胞杆菌 毒素基因 多重聚合酶链式反应 灵敏度 煮沸法 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13481/j.1671‑587X.20220516

馆 藏 号：203114818...