利用质谱分析法从酶谱鉴定嗜热真菌木聚糖酶

作     者：吴亚宁 刘刚 余少文 李水明 王娟 WU Ya-ning;LIU Gang;YU Shao-wen;LI Shui-ming;WANG Juan

作者机构：深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室广东深圳518060 深圳大学生命科学学院深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室广东深圳518060 

出 版 物：《食品研究与开发》 (Food Research and Development)

年 卷 期：2013年第34卷第17期

页      码：116-120页

摘      要：通过对前期筛选到的一株嗜热真菌Talaromyces thermophilus WYN9进行产木聚糖酶的诱导和非诱导培养。诱导培养的上清液中可以检测到木聚糖酶酶活。在非变性胶和变性胶SDS-PAGE中,诱导和非诱导的酶谱条带差异明显。以非诱导酶谱为对照,将诱导酶谱中与其有显著差异的条带切下,回收蛋白,测定酶活。将有木聚糖酶酶活的蛋白通过SDS-PAGE进一步分离纯化,切胶后使用胶内酶切法进行预处理,使用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)进行分析。结果表明该蛋白与拟青霉属Paecilomyces sp.J18的内切木聚糖酶高度同源。根据质谱分析结果设计兼并引物,通过交错式热不对称PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)扩增,获得了TtXynA基因全长。根据Kimura双参数模型用临近相邻法构建了TtXynA及其同源蛋白的进化树。

主 题 词：质谱 酶谱 11家族木聚糖酶 嗜热踝节菌 进化分析 

学科分类：0832[0832] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 070302[070302] 0703[理学-化学类] 083201[083201] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.17.031

馆 藏 号：203115020...