猪瘟病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：岳锋 朱艳平 银梅 王选年 YUE Feng;ZHU Yan-ping;YIN Mei;WANG Xuan-nian

作者机构：新乡学院生命科学与技术系河南新乡453003 新乡学院生物技术研究所河南新乡453003 河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 

基　　金：国家自然科学基金(31291877 31272539) 河南省科技厅基础与前沿技术研究项目(122300410150) 河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A230837) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第41卷第6期

页      码：18-22页

摘      要：根据GenBank中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)5′NTR的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,以CSFV全长基因重组质粒pGEM-CSFV为标准品,建立TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并检测人工感染CSFV后不同时期猪血浆中CSFV的载量。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,R2=0.999;敏感性高,最低检测限为1×101拷贝/μL;特异性强,与猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应性;重复性好,组内和组间变异系数均小于2%。人工感染CSFV后第7天猪血浆中CSFV载量达到峰值,之后逐渐降低。结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、重复性好等优点,为CSFV的定量分析及临床诊断奠定基础。

主 题 词：猪瘟病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203115047...