缺失GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的克隆及植物表达载体构建

作     者：温瑞 郑重 周雪平 

作者机构：浙江大学生物技术研究所浙江杭州310029 浙江大学植物保护系浙江杭州310029 

基　　金：浙江省农科教结合重点项目 教育部"跨世纪优秀人才培养计划"基金及"高等学校优秀青年教学和科研奖励基金资助项目 

出 版 物：《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 (Journal of Zhejiang University:Agriculture and Life Sciences)

年 卷 期：2001年第27卷第5期

页      码：531-534页

摘      要：以 CMV亚组 1株系 Fny- CMV RNA2基因组为模板 ,根据其序列设计引物进行 PCR扩增 ,得到 2 .5 kb的全长复制酶基因扩增产物 .对此产物进行纯化 ,并用 N co I和 Bsp HI进行双酶切 ,得到 3个片段 .将不含有 GDD保守区的 2个片段用 T4 DNA连接酶连接 ,并对连接产物进行 PCR扩增 ,得到 2 .2kb左右缺失 GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的扩增产物 .将其克隆到 p GEM- T Easy Vector上 ,进行序列测定 ,结果表明 GDD保守区确已缺失 .该缺失不导致开放阅读框架的移码 .将缺失 GDD保守区的基因定向克隆到植物表达载体 p BI12 1中 ,并经三亲交配导入根癌农杆菌中 ,经 PCR及酶切鉴定 。

主 题 词：黄瓜花叶病毒 复制酶 植物表达载体 基因克隆 GDD保守区缺失 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1008-9209.2001.05.015

馆 藏 号：203115061...