鉴别布鲁菌A19疫苗株的双重荧光定量PCR方法的建立与应用

作     者：董浩 原霖 刘洋 徐阳 陈亚娜 沈子莹 梁春南 DONG Hao;YUAN Lin;LIU Yang;XU Yang;CHEN Yana;SHEN Ziying;LIANG Chunnan

作者机构：中国食品药品检定研究院北京102600 中国动物疫病预防控制中心北京102600 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31602055) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第9期

页      码：1845-1850页

摘      要：为建立一种可以鉴别布鲁菌A19疫苗株和其他布鲁菌的双重荧光定量PCR方法,分别设计特异性扩增布鲁菌BCSP31基因序列和A19疫苗株缺失序列的2套引物探针,对引物和探针浓度进行优化,并对其敏感性、特异性和重复性进行评价。结果表明,用该方法对2种阳性质粒标准品的最低检测限均为10拷贝/μL;该方法扩增A19疫苗株的核酸时只呈现出1条特异性的扩增曲线,扩增其他布鲁菌菌株(包括疫苗株与野毒株)的核酸时,会出现2条特异性的扩增曲线,而非布鲁菌的细菌核酸均未出现特异性的扩增曲线。该方法的批内和批间重复变异系数均小于3%,重复性良好。对122份临床样品的检测结果显示该方法的阳性样品检出率高于套式PCR检测方法和Bruce-Ladder PCR方法,并可对A19疫苗株的核酸进行鉴别。本研究建立的鉴别布鲁菌A19疫苗株的双重荧光定量PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,可作为临床上进行A19疫苗株鉴别的一种检测方法。

主 题 词：布鲁菌 A19疫苗株 荧光定量PCR 鉴别诊断 

学科分类：090601[090601] 1002[医学-临床医学类] 09[农学] 0906[农学-水产类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.09.18

馆 藏 号：203115086...