VDAC1参与调控BCG感染RAW264.7细胞凋亡

作     者：宋阿北 李瑞乾 缪西鹏 谢玉杰 高瑞 许立华 SONG Abei;LI Ruiqian;MIAO Xipeng;XIE Yujie;GAO Rui;XU Lihua

作者机构：宁夏大学农学院宁夏银川750021 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31760722 31560687) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第9期

页      码：1878-1888页

摘      要：旨在研究电压依赖性阴离子通道(voltage dependent anion channel1,VDAC1)对卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin, BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的调控作用及其机制。设计并合成VDAC1的小干扰RNA(si-VDAC1)转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后,再用BCG感染。后续采用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位及细胞内ROS水平,进而通过实时荧光定量PCR和Western blot检测凋亡相关因子Cyt C、Caspase-3、PARP1、Caspase-9基因(mRNA)及其蛋白的表达。随后,通过使用VDAC1寡聚抑制剂VBIT-4对RAW264.7进行孵育2 h后感染BCG,并采用免疫荧光染色技术观察Caspase-3和Western blot检测凋亡相关因子Cyt C、Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP1、Cleaved-Caspase 9的含量变化。BCG感染巨噬细胞12 h后,与对照相比,BCG感染后小鼠巨噬细胞存活率约下降至50%,而凋亡率显著上调到52.12%(P<0.001),线粒体膜电位降低(P<0.001),细胞内ROS水平升高(P<0.001),并且凋亡关键调控因子Cyt C、Caspase-3、PARP1、Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0.001);当用si-VDAC1和BCG共同处理小鼠巨噬细胞时,细胞存活率、细胞凋亡率、线粒体膜电位水平、细胞内ROS水平及凋亡关键调控因子均显著得到了恢复(P<0.001);使用VDAC1寡聚抑制剂VBIT-4处理后同BCG处理组相比,VBIT-4显著抑制了VDAC1寡聚体的形成和凋亡相关因子Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP1、Cleaved-Caspase 9剪切体的含量(P<0.001)。结果表明,VDAC1可通过寡聚形成大的通道影响线粒体外膜通透性,通过Cyt C等凋亡蛋白释放的途径参与调控BCG感染RAW264.7诱导的细胞凋亡。

主 题 词：电压依赖性阴离子通道 调控 RAW264.7细胞 卡介苗 细胞凋亡 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.09.23

馆 藏 号：203115105...