鹅源星状病毒TaqMan探针和SYBR Green Ⅰ染料法荧光定量PCR检测方法的建立及其应用比较

作     者：邓昕竹 余群 朱盈名 赵自亮 陆婧 赵光伟 张立武 程方俊 杨晓伟 DENG Xinzhu;YU Qun;ZHU Yingming;ZHAO Ziliang;LU Jing;ZHAO Guangwei;ZHANG Liwu;CHENG Fangjun;YANG Xiaowei

作者机构：西南大学动物医学学院重庆荣昌402460 重庆三杰众鑫生物工程有限公司重庆荣昌402460 

基　　金：农牧高新技术产业研发专项基金资助项目 贵州省科技支撑基金资助项目(2020-1Y032) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第10期

页      码：1970-1976页

摘      要：鹅源星状病毒(goose astrovirus, GoAstV)是国内新发雏鹅痛风病病原,为更好地应用于临床检测,本试验针对GoAstV分别建立了基于TaqMan探针和SYBR GreenⅠ染料的2种实时荧光定量PCR方法,并比较两者的优劣。首先根据GoAstV的ORF1b基因保守序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件和反应体系,分别建立TaqMan和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并对其进行特异性、敏感性、重复性测定和临床样品检验。结果显示,2种方法均能特异性检测GoAstV,Ct值在质粒标准品浓度2.5×10~2~2.5×10~8 copies/μL范围内线性关系良好,相关系数均为0.999;探针法和染料法的最低检测限分别为2.5×10~1,2.5×10~2 copies/μL;2种方法重复性试验组内与组间变异系数均小于2.50%。对近1年收集的71份临床疑似样本进行检测,探针法和染料法的阳性检出率分别为49.30%和42.25%,探针法的检出率较高。结果表明,本试验建立的TaqMan探针和SYBR GreenⅠ染料荧光定量PCR方法均具有特异性强、敏感性高、重复性好优点,可应用于临床GoAstV的检测,其中尤以TaqMan探针法的灵敏度较高。

主 题 词：鹅源星状病毒 荧光定量PCR TaqMan探针 SYBR GreenⅠ染料 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.10.07

馆 藏 号：203115365...