鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用

作     者：江丹丹 林昶 黄志坚 肖世峰 王劭 林锋强 程晓霞 朱小丽 陈秀琴 董慧 陈少莺 陈仕龙 JIANG Dan-dan;LIN Chang;HUANG Zhi-jian;XIAO Shi-feng;WANG Shao;LIN Feng-qiang;CHENG Xiao-xia;ZHU Xiao-li;CHEN Xiu-qin;DONG Hui;CHEN Shao-ying;CHEN Shi-long

作者机构：福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)福建福州350002 三明市绿色食品发展中心福建三明365000 

基　　金：福建省公益类科研院所专项(2019R1026-11) 福建省农业科学院创新团队项目(CXTD2021034) 福建省农业科学院“5511”协同创新工程(XTCXGC2021018、XTCXGC2021012) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第44卷第8期

页      码：855-860页

摘      要：番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1)。为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2 fiber1基因序列特征,分别设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法。结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强。将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μL,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×10^(1) TCID_(50),敏感性较高。批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好。利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64)。以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段。

主 题 词：鸭腺病毒B血清1型 鸭腺病毒B血清2型 fiber基因 fiber1基因 双重PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.202112015

馆 藏 号：203115451...