西伯利亚鲟MHCⅡβ克隆、原核表达和多克隆抗体制备

作     者：田照辉 胡红霞 王巍 东天 孙爱 Tian Zhaohui

作者机构：北京农林科学院水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心北京100068 

基　　金：现代农业产业技术体系北京市鲟鱼、鲑鳟鱼创新团队项目(编号:BAIC08—2018) 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2022年第50卷第20期

页      码：201-206页

摘      要：旨在构建西伯利亚鲟(Acipenser baerii)MHCⅡβ基因原核表达载体高效表达,并进行多克隆抗体的制备。根据GenBank西伯利亚鲟MHCⅡβ基因序列设计引物,并加上6-His标签和酶切位点,从西伯利亚鲟脾脏细胞中克隆可读编码框(不含信号肽)部分,克隆并测序鉴定后构建Pet30α-MHCⅡβ质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷IPTG诱导表达,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(Western Blot)鉴定,诱导表达的融合蛋白大小约为32 ku,能够与His抗体结合,融合蛋白主要以包涵体形式存在,在温度37℃时1 mmol/L的IPTG诱导4 h可以达到最佳表达量。将表达蛋白通过镍柱层析纯化后,制备兔多克隆抗体,抗体效价达到243 W,为深入研究西伯利亚鲟MHCⅡβ基因免疫学功能提供参考。

主 题 词：西伯利亚鲟 MHCⅡβ基因 原核表达 多克隆抗体 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.15889/j.issn.1002-1302.2022.20.030

馆 藏 号：203115460...