犬黑皮质素受体-4突变体D298N真核表达载体的构建及其在MDCK细胞中的表达

作     者：宋立先 刘春红 王占青 高蓉 徐学振 SONG Li-xian;LIU Chun-hong;WANG Zhan-qing

作者机构：滨州医学院烟台附院山东烟台264100 

基　　金：辽宁省科技基金项目(2007408001-6) 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2022年第50卷第20期

页      码：76-80页

摘      要：[目的]引进犬MC4R突变点,构建突变体D298N表达载体并在MDCK细胞中获得表达。[方法]设计带突变点D298N引物,以犬MC4R基因组DNA为模板,采用普通PCR和Overlap-PCR扩增编码区,将产物克隆、酶切、测序鉴定。将测序正确的基因连接到pcDNA3.1-myc-His/A载体上,将重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R-D298N酶切、鉴定,将测序正确的重组体转染到MDCK细胞中,继续培养3 d,提取细胞总RNA,并采用RT-PCR方法检测基因表达。提取细胞总蛋白,Western Blot鉴定蛋白表达。[结果]构建带D298N突变点的真核表达载体,提取质粒后有2处碱基不同,分别是777位碱基T→C,892位碱基G→A(引入的突变位点)。转染到MDCK后,RT-PCR和Western Blot均检测到重组体在基因水平和蛋白水平的表达。[结论]成功构建犬的重组体真核表达载体并在MDCK细胞中表达。

主 题 词：犬 黑皮质素受体-4 真核表达载体 定点诱变 D298N MDCK细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.20.020

馆 藏 号：203115467...