沙门氏菌活菌实时PCR检测方法研究

作     者：黎财慧 姚丽锋 张晴阳 丁琦 冯家望 LI Cai-Hui;YAO Li-Feng;ZHANG Qing-Yang;DING Qi;FENG Jia-Wang

作者机构：拱北海关技术中心珠海519015 

基　　金：珠海市重点科研项目(ZH22036201210211PWC) 拱北海关科技计划项目(2021GK011) 

出 版 物：《中国口岸科学技术》 (China Port Science and Technology)

年 卷 期：2022年第4卷第10期

页      码：71-78页

摘      要：建立一种叠氮溴化乙锭结合荧光PCR(Ethidium monoazide bromide real-time PCR,EMA-RT-PCR)快速检测沙门氏菌活菌的技术。以沙门氏菌f imY基因为靶点设计特异性引物,通过菌液浓度及叠氮溴化乙锭(Ethidium monoazide bromide,EMA)相关反应条件的优化,建立沙门氏菌活菌的EMA-RT-PCR方法。经反应条件优化后,当EMA浓度为2.5μg/mL,暗反应5 min,曝光反应10 min条件下对10^(6)CFU/mL的沙门氏菌抑制效果最好,活菌的扩增没有影响,死菌的扩增受到抑制,所构建的沙门氏菌EMA-RT-PCR方法的检测灵敏度为2.5×10^(2)CFU/mL。用该方法检测8批次受沙门氏菌人工污染的阳性样品,结果显示该方法均能正常检出带活菌的样本,检测时间为4~5 h,比传统检测时间大大缩短。EMA-RT-PCR方法能准确区分活死菌,适合作为沙门氏菌的快速初筛方式。

主 题 词：沙门氏菌 叠氮溴化乙锭 实时荧光PCR 活菌 

学科分类：09[农学] 0903[农学-动物生产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-4689.2022.10.012

馆 藏 号：203115475...