猪细小病毒实时荧光定量LAMP检测方法的建立与初步应用

作     者：曹志 郑佳 尹德华 杨瑞梅 黄娟 单虎 CAO Zhi;ZHENG Jia;YIN De-hua;YANG Rui-mei;HUANG Juan;SHAN Hu

作者机构：青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 

基　　金：山东省生猪产业技术体系项目(SDAIT-08-07) 青岛农业大学高层次人才启动基金项目(663-1120018) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第52卷第10期

页      码：1238-1244页

摘      要：为了建立猪细小病毒(PPV)核酸环介导等温扩增(LAMP)定量检测方法,选择PPVNS1基因序列为靶序列,设计3对特异性引物,通过优化反应体系和反应条件,筛选用于提高反应体系稳定性的化学制剂,建立了一种PPV的实时荧光定量LAMP(qLAMP)检测方法。结果显示,添加Eva Green的反应体系的扩增效果明显好于SYBR GreenⅠ和钙黄绿素;体系中加入的10 g/L聚丙烯酰胺使质粒标准品在1.39×10^(5)~1.39×10^(1)copies/μL和C_(t)值之间的线性关系良好,标准曲线方程为Y=-2.9435X+44.354,相关系数R^(2)为0.9849;该方法不与其他病毒的核酸样品发生交叉反应,检测灵敏度达13.9 copies/μL,变异系数≤1.08%;对200份流产猪胎儿的样品进行检测,阳性率为18%,与实时定量PCR的检测结果一致。本试验中建立的qLAMP检测方法为PPV的临床快速检测提供了新方法。

主 题 词：猪细小病毒 环介导等温扩增 实时荧光 定量检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0173

馆 藏 号：203115484...