前列腺癌组织中胶原三股螺旋重复蛋白1基因转录水平微滴数字PCR检测方法的建立及验证

作     者：杨德平 张艳 刘莹 张培燕 孔娜娜 郑江花 YANG De-ping;ZHANG Yan;LIU Ying;ZHANG Pei-yan;KONG Na-na;ZHENG Jiang-hua

作者机构：上海健康医学院附属周浦医院医学检验科上海201318 上海中医药大学附属龙华医院检验科上海200032 同济大学医学院附属上海市同济医院中心实验室上海200092 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81372318) 上海市科委生物医药科技支撑专项(21S11902100) 上海市浦东新区卫生和计划生育委员会领先人才培养计划(PWRL2017-07) 上海健康医学院2020年师资人才百人库(B3-0200-20-311008) 2019年周浦医院院级科研项目(ZPXM-2019A-11) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2022年第35卷第11期

页      码：1378-1383页

摘      要：目的建立前列腺癌组织中胶原三股螺旋重复蛋白1(collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1)基因转录水平的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并进行验证。方法根据GenBank中登录的CTHRC1基因序列设计引物,扩增CTHRC1保守区基因片段,并合成含有该基因片段的PUC57质粒。经2%琼脂糖凝胶电泳验证引物的特异性后,采用PUC57质粒验证ddPCR法的正确度、精密性,并确定检测限及线性范围。采用建立的ddPCR法检测复旦大学附属中山医院泌尿外科住院患者73份前列腺穿刺组织样本(前列腺癌组织40份,非前列腺癌组织33份)中的CTHRC1基因转录水平,同时采用试剂盒检测患者血清中的总前列腺特异抗原(total prostate specific antigen,TPSA)水平,将相应结果进行ROC曲线分析,以获得CTHRC1-TPSA联合检测对诊断前列腺癌的预测概率。结果经2%琼脂糖凝胶电泳验证设计的引物具有良好的特异性。检测值和理论值之间的Log值差异均<1,且拟合度高,R2=0.9959,表明该方法具有良好的正确度;重复性验证CV均<10%,中间精密性验证CV均<15%;该方法的检测限为100copies/μL;检测值在100~104copies/μL范围内,与理论值呈良好的线性相关性,R2=0.9972。ddPCR法检测前列腺癌组织中CTHRC1基因转录水平显著高于非前列腺癌组织(Z=-4.339,P<0.001)。CTHRC1与TPSA联合诊断前列腺癌的ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.847,灵敏度为83.3%,特异性为67.7%。结论ddPCR法可用于前列腺癌组织中CTHRC1基因转录水平的检测,与TPSA指标联合可提高临床诊断前列腺癌的准确性。

主 题 词：前列腺癌 胶原三股螺旋重复蛋白1 微滴数字PCR法 总前列腺特异抗原 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003756

馆 藏 号：203115530...