犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬冠状病毒多重PCR方法的建立及应用

作     者：李少晗 陈鑫 张广智 刘维全 秦彤 LI Shao-han;CHEN Xin;ZHANG Guang-zhi;LIU Wei-quan;QIN Tong

作者机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 农业农村部兽用药物与诊断技术北京科学观测实验站北京100193 中国农业大学生物学院北京100193 

基　　金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项项目(2021-YWF-ZX-11) 中国农业科学院科技创新工程项目(ASTIP-IAS15) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第43卷第12期

页      码：31-36页

摘      要：为建立一种特异、高通量同时检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、Ⅰ型及Ⅱ型犬冠状病毒(CCoV)的多重PCR方法,根据GenBank相关病毒基因序列,选取CPV VP2基因、CDV H基因和CCoV M基因高度保守序列区域,设计引物分别用于扩增长度为573 bp(CPV)、410 bp(CDV)、289 bp(CCoV-Ⅰ)、105 bp(CCoV-Ⅱ)的4条特异性目的片段。经反应条件优化,利用建立的多重PCR进行特异性、敏感性及重复性试验。结果表明,在同一PCR反应体系中可以同时检测到以上4种病毒,而大肠埃希氏菌、沙门氏菌、多形拟杆菌、犬副流感病毒(CPIV)及犬腺病毒(CAV)均未检测到,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的最低检测限分别为1×10^(7)copies/μL、1×10^(3)copies/μL、1×10^(6)copies/μL和1×10^(4)copies/μL,与单项PCR敏感性差异较小;3个不同浓度模板于不同时间、不同PCR仪器扩增,结果重复稳定性良好;使用该方法对50份临床病例进行检测,CPV、CDV、CCoV-Ⅰ及CCoV-Ⅱ的感染阳性率分别为32%(16/50)、24%(12/50)、18%(9/50)、10%(5/50),发现有CPV+CCoV-Ⅰ、CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ及CDV+CCoV-Ⅰ+CCoV-Ⅱ混合感染病例。证明建立的多重PCR具有高效、敏感、特异性强、重复性好的特点,并能够实际应用于临床样品检测中,为今后犬重要疫病的流行病学调查及病原学研究提供帮助。

主 题 词：多重PCR 犬细小病毒 犬瘟热病毒 犬冠状病毒Ⅰ型 犬冠状病毒Ⅱ型 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2022.12.006

馆 藏 号：203115576...