靶向肿瘤细胞PD-L1的shRNA慢病毒干扰载体的构建

作     者：孙杰 贾裕 贾旭 陈阳 佟莹莹 金微洋 杨光华 Sun Jie;Jia Yu;Jia Xu;Chen Yang;Tong Yingying;Jin Weiyang;Yang Guanghua

作者机构：上海海洋大学科技部生物科学国际研究中心上海201306 上海海洋大学国家水生动物病原体收集中心上海201306 上海海洋大学水产动物遗传育种中心上海201306 浙江华医健康产业发展有限公司浙江杭州311500 

基　　金：本研究由上海市科研计划项目(19411951100)资助 

出 版 物：《广东化工》 (Guangdong Chemical Industry)

年 卷 期：2022年第49卷第23期

页      码：36-40页

摘      要：目的:利用RNAi技术构建靶向抑制肿瘤细胞PD-L1表达的shRNA慢病毒干扰载体,用于解除肿瘤细胞的免疫逃逸机制。方法:利用Designer3.0(Genepharma)软件以PD-L1为靶点设计4种shRNA基因序列,将shRNA序列插入到慢病毒载体中,连接产物转化后在选择性培养基上筛选阳性菌落并提取重组质粒,进行双酶切及测序鉴定,荧光显微镜观察慢病毒转染效果,westernblot对目的基因PD-L1四个靶点筛选获得PD-L1蛋白表达并计算出重组慢病毒的干扰效率。结果:限制性核酸内切酶Xba I和Nhe I双切鉴定结果皆为1000 bp大小的阳性重组载体;测序结果与shRNA模版一致;荧光显微镜观察结果显示慢病毒转染效果较好;western blot结果显示SH1、SH4组PD-L1表达无抑制,SH2、SH3组PD-L1表达有抑制;SH1组干扰效率19.75%,SH2组干扰效率32.10%,SH3组干扰效率40.74%,SH4组干扰效率7.41%。讨论:SH3组重组慢病毒对PD-L1表达有抑制作用且干扰效率最高,成功构建了一款靶向肿瘤细胞PD-L1的shRNA慢病毒干扰载体,为利用RNAi技术干扰PD-L1靶点的肿瘤免疫治疗奠定了实验基础。

主 题 词：PD-L1基因 RNA干扰 慢病毒载体 

学科分类：0817[工学-轻工类] 08[工学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-1865.2022.23.013

馆 藏 号：203115646...