粪便中日本血吸虫虫卵DNA的提取及PCR检测方法的优化

作     者：王珍丽 汪天平 汪奇志 操治国 刘晓明 肖祥 尹晓梅 周利 汪峰峰 章乐生 Wang Zhenli;Wang Tianping;Wang Qizhi;Cao Zhiguo;Liu Xiaoming;Xiao Xiang;Yin Xiaomei;Zhou Li;Wang Fengfeng;Zhang Lesheng

作者机构：皖南医学院寄生虫学教研室芜湖市241000 安徽省血吸虫病防治研究所 

基　　金：安徽省国际科技合作项目(06088017) 

出 版 物：《热带病与寄生虫学》 (Journal of Tropical Diseases and Parasitology)

年 卷 期：2008年第6卷第3期

页      码：125-128,132页

摘      要：目的建立一套系统、完整的粪便日本血吸虫虫卵DNA提取法及PCR优化体系。方法利用蛋白酶K和苯酚法从感染日本血吸虫尾蚴的家兔粪便中提取DNA,根据日本血吸虫基因(AF00369)设计特异性引物,以粪便中提取的DNA为模板,采用PCR方法扩增目的基因片段,对PCR方法的各种反应条件进行优化并采用有限稀释法推测PCR检测法可检测到的最低虫卵数。结果以感染家兔的粪便中提取的DNA为模板,用PCR方法可扩增到分子量大小约为400 bp的特异性条带,测序结果经BLAST工具进行分析,与日本血吸虫基因(AF00369)比对的同源性为96%;25μl PCR反应体系的最优化反应条件:MgCl2 1.5μl;dNTP 0.5μl;引物1.0μl;DNA模板5.0μl;Taq DNA聚合酶0.5μl。扩增程序为:94℃预变性5min、94℃变性30s、53℃退火30s、72℃延伸30s,30个循环、72℃延伸7min、4℃保存。PCR检测法可检测到的最低虫卵数为0.015个。结论成功建立感染家兔粪便中虫卵DNA的提取方法及PCR血吸虫基因片段检测方法,同时对PCR反应条件进行优化,为从分子角度检测日本血吸虫虫卵DNA提供科学的实验依据。

主 题 词：日本血吸虫 虫卵DNA 粪便 聚合酶链式反应 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-2302.2008.03.001

馆 藏 号：203115682...