酿酒酵母HOR2基因缺失突变株的构建

作     者：陈永金 林晓华 王艳尊 雷娟娟 黄建忠 

作者机构：福建师范大学生命科学学院工业微生物教育部工程研究中心福建现代发酵技术工程研究中心福建福州350108 

基　　金：国家"948"项目(No.2006-G37) 福建省发改委重大项目(No.477) 福建省科技平台建设项目(No.2005Q007)资助 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2010年第20卷第2期

页      码：6-8页

摘      要：目的:构建酿酒酵母HOR2基因缺失的突变株并研究其对甘油和乙醇产量的影响。方法:以PCR为基础,通过同源重组的方式使目的基因缺失。结果:通过设计含有与HOR2(GPP2)基因两侧序列同源的长引物,以质粒PUG6为模板进行PCR构建含有Cre/loxP系统的酿酒酵母HOR2基因敲除组件,转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS2,获得为loxP-kan-loxP序列组件所替换而产生kanr的阳性克隆子。然后再将质粒PSH65转入阳性克隆子诱导表达Cre酶切除筛选标记,在原ORF基因处保留一个loxP位点,丢失质粒后获得HOR2单倍体缺陷型菌株。重复转化敲除组件实现另一条等位基因的敲除。发酵实验表明,突变株甘油产量降低3.34%,乙醇产量提高1.96%。结论:成功获得了酿酒酵母HOR2基因缺失的突变株,并命名为YS2-HOR2。

主 题 词：酿酒酵母 HOR2基因 基因敲除 乙醇 甘油 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16519/j.cnki.1004-311x.2010.02.005

馆 藏 号：203115707...