羊源A型产气荚膜梭菌α毒素基因截短表达及其间接ELISA方法的建立与应用

作     者：李通 孟卫芹 马力 陈金龙 沈志强 王金良 韩先杰 LI Tong;MENG Weiqin;MA Li;CHEN Jinlong;SHEN Zhiqiang;WANG Jinliang;HAN Xianjie

作者机构：青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 

基　　金：山东省现代农业产业技术体系羊创新团队岗位专家资助项目(SDAIT-10-07) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第12期

页      码：2407-2412页

摘      要：基于GenBank登录的产气荚膜梭菌α毒素的氨基酸序列进行抗原决定簇及抗原性的分析,确定优势抗原区(101 aa~334 aa)。设计合成1对引物,以A型产气荚膜梭菌的DNA为模板,应用PCR方法扩增出702 bp大小的基因片段,克隆至表达载体pET32a(+)中进行原核表达。经亲和层析纯化的蛋白,Western blot鉴定相对分子质量约为43 kDa。以纯化的截短α毒素蛋白为包被抗原建立了间接ELISA方法,最适条件:2 mg/L重组蛋白100μL/孔、4℃过夜包被,血清样本1∶50稀释、37℃孵育40 min,HRP标记二抗1∶2500稀释、37℃孵育40 min,底物37℃显色10 min后终止反应。使用建立的方法对226份临床羊血清进行检测,阳性率为71.68%。结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于羊群疫苗免疫后的抗体监测及流行病学调查,为试剂盒的开发奠定了基础。

主 题 词：羊源产气荚膜梭菌 α毒素 截短表达 间接ELISA 抗体检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.12.10

馆 藏 号：203115819...