猪δ冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

作     者：尚再卓 于瑞明 张莉萍 王永录 潘丽 杜晓华 刘霞 刘新生 SHANG Zaizhuo;YU Ruiming?;ZHANG Liping;WANG Yonglu;PAN Li;DU Xiaohua;LIUXia;LIU Xinsheng

作者机构：甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730030 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 

基　　金：“十三五”国家重点研发计划资助项目(2016YFD0501505) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第12期

页      码：2339-2346页

摘      要：以大肠杆菌表达系统表达的猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)截短抗原S1-CTD蛋白作为包被抗原,建立能够检测血清特异性IgA抗体的间接ELISA方法。以本实验室分离保存的PDCoV流行株CH/XJYN/2016(MN064712)的S基因为模板设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增出S基因抗原表位区S1-CTD(877~1299 bp),构建原核表达载体pET24a-S1-CTD,经IPTG诱导表达重组蛋白S1-CTD,纯化后作为包被抗原建立了检测PDCoV特异性IgA抗体的间接ELISA方法。结果显示,抗原最佳包被质量浓度为8 mg/L,血清和酶标二抗最佳稀释比例为1∶10和1∶5000;S/P≥0.489判定为阳性,S/P<0.489判定为阴性。该方法与猪流行性腹泻病毒、猪嵴病病毒、口蹄疫病毒及猪瘟病毒的标准阳性血清均无交叉反应,特异性良好;批内和批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性。间接ELISA检查方法的建立为PDCoV的血清学调查及免疫效果评价提供了有效的检测手段,为进一步开发临床检测试剂盒奠定基础。

主 题 词：猪δ冠状病毒 S1-CTD蛋白 间接ELISA IgA抗体 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.12.01

馆 藏 号：203115866...