牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒及牛支原体三重Nano-PCR方法的建立与初步应用

作     者：叶京飞 孙飞雁 赵立峰 薛力刚 伞智豪 郭利 程悦宁 YE Jing-fei;SUN Fei-yan;ZHAO Li-feng;XUE Li-gang;SAN Zhi-hao;GUO Li;CHENG Yue-ning

作者机构：中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112 吉林农业科技学院吉林吉林132109 

基　　金：吉林省科技发展计划基金项目(20210202101NC) 吉林省创新创业人才项目(2021Y034) 吉林农业科技学院博士科研启动基金项目(吉农院合字第7008号) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第52卷第12期

页      码：1503-1509页

摘      要：为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体,本研究针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)保守基因进行引物设计,并成功构建标准阳性质粒。使用纳米金颗粒将普通PCR方法优化,建立了三重Nano-PCR检测方法。结果显示,三重Nano-PCR检测方法可同时检测出BVDV、IBRV和MB的阳性质粒(1μL)最低检测分别为1 fg、100 ag、10 fg,灵敏度分别为常规PCR的10、10、100倍。临床结果显示,30份采集于临床呼吸道病牛样品中,BVDV、IBRV和MB的Nano-PCR的检测阳性率分别为33.33%、36.67%、33.33%,而普通PCR的检测阳性率分别为26.67%、30%、20%,提示BVDV和IBRV混合感染最多,阳性率可达26.67%。三重Nano-PCR方法特异性良好,检测其他牛呼吸道相关病原体BCV、BPIV3和BRV时结果均呈阴性。本研究建立的快速灵敏且特异良好的三重Nano-PCR检测方法可广泛应用于临床诊断和流行病学筛查。

主 题 词：Nano-PCR 牛病毒性腹泻病毒 牛传染性鼻气管炎病毒 牛支原体 快速检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0201

馆 藏 号：203116284...