基质金属蛋白酶-9靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测

作     者：顾晓琼 万根平 陈兆鸿 Gu Xiaoqiong;Wan Gengping;Chen Zhaohong

作者机构：广东省广州市妇女儿童医疗中心邮政编码广州510120 

基　　金：广东省自然科学基金项目(07002329) 广州市医药卫生科技项目(2005-YB-058 2007-YB-061 2007-YB-067) 广东省医学科学技术研究基金项目(A2008548) 广东省科技计划项目(73098) 

出 版 物：《微循环学杂志》 (Chinese Journal of Microcirculation)

年 卷 期：2009年第19卷第4期

页      码：17-21页

摘      要：目的:构建针对人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对川崎病(KD)血清诱导的血管内皮细胞MMP-9高表达的干扰效果。方法:依据siRNA设计原则设计两对MMP-9基因的特异性干扰序列,体外分别合成两端含BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后与pSilencer3.1-HI neo线性质粒连接,转化DH5α感受态菌株,筛选阳性克隆,提取质粒进行双酶切及琼脂糖电泳鉴定。阳性重组质粒测序。将构建的两个MMP-9 siRNA质粒以KD血清作为诱导因子,用脂质法转染内皮细胞ECV-304,应用RT-PCR法测定各实验组血管内皮细胞MMP-9mRNA表达、Western blot检测各组MMP-9蛋白表达情况,对所构建的MMP-9 siRNA质粒进行效应检测。结果:DNA测序证实合成的并被克隆入pSilencer3.1-HI neo表达质粒siRNA插入序列与设计完全符合。KD血清组MMP-9蛋白及mRNA表达水平均较正常血清组明显升高(P<0.05);而所构建的两个MMP-9 siRNA及人血丙种球蛋白均能显著抑制KD血清的上述诱导作用(P<0.05)。结论:成功构建的两个MMP-9 siRNA比人血丙种球蛋白更能高效、特异地抑制MMP-9的表达,为进一步研究MMP-9基因对KD冠状动脉病变的影响及其临床应用奠定了基础。

主 题 词：基质金属蛋白酶-9 RNA干扰 重组载体 检测 靶向 冠状动脉扩张 川崎病 动脉瘤 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 071007[071007] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-1740.2009.04.006

馆 藏 号：203116382...