大鼠半胱氨酸蛋白水解酶-3基因真核表达质粒和RNA干扰质粒的构建及鉴定

作     者：吴靖平 朱斌 丁磊 李德芳 WU Jing-ping;ZHU Bin;DING Lei;LI De-fang

作者机构：复旦大学附属金山医院骨科上海200540 

基　　金：上海市卫生局基金资助项目(2009-35市卫生局) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2011年第28卷第9期

页      码：1564-1567页

摘      要：目的构建SD大鼠半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3的真核表达质粒和干扰质粒，探究干扰质粒对Caspase-3表达的干预效应。方法从SD大鼠软骨终板细胞中获得模板cDNA并扩增，约834bp。克隆至载体pEGFP—N1，获得重组质粒pEGFP-N1-Caspase-3。针对Caspase-3设计4对RNAi靶点序列，克隆至载体pcDNA6．2。成功构建pcDNA6．2-caspase．3．1、pcDNA6．2-caspase-3-2、pcDNA6．2-Caspase-33、pcDNA6．2-caspase-3-4，构建对照质粒pcDNA6．2-HIiRNA。将5个干扰质粒分别与***_3（用量比为7：1）共转染至293T细胞，qPCR检测转染48h后对caspase．3表达的干预效应。结果通过菌落聚合酶链反应（PCR）、酶切及测序表明pEGFP-N1-Capase-3和干扰质粒构建成功；共转293T细胞后，qeCR示pcDNA6．2-Caspase-32、pcDNA6．2-Caspase-3-3干预组的caspase-3的表达高于对照组，分别为33％和8％，而pcDNA6．2-Caspase-3-1、pcDNA6．2-Caspase-34干预组的caspase-3的表达与对照组比较明显减少，抑制效率分别为24％和67％（P〈0．05）。结论成功构建了Caspase．3的表达质粒和干扰质粒，并证实pcDNA6．2-Caspase-34对Caspase-3的表达具有明显的抑制效应。

主 题 词：RNA干扰 半胱氨酸蛋白水解酶-3 质粒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2011.09.059

馆 藏 号：203116456...