禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

作     者：秦智锋 吕建强 肖性龙 钟安清 林镜中 黄运生 林庆燕 陈书琨 金显忠 林苗 刘胜利 QIN Zhi-feng;LV Jian-qiang;XIAO Xing-long;ZHONG An-qing;LIN Jin-zhong;HUANG Yun-sheng;LIN Qing-yan;CHENG Shu-kun;JIN Xian-zhong;LIN Miao;LIU Sheng-li

作者机构：深圳出入境检验检疫局深圳518045 深圳太太基因工程有限公司深圳518057 

基　　金：本课题为深圳出入境检验检疫局科学研究与技术开发重大项目(SZK01-2004) 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2006年第22卷第2期

页      码：131-136页

摘      要：为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针。将各个亚型引物与探针优化组合,筛选出能够同时检测禽流感病毒H5、H7、H9 3个亚型、且对Ct值和扩增效率影响不大的3组引物和探针,建立了三重实时荧光RT-PCR方法。该方法特异性好,在我们检测的样品中,没有发现假阳性和假阴性现象。同时敏感性高,检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的敏感性分别达到1 0001、000、500个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对禽流感H5、H7、H9 3个亚型的不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测3个病毒亚型。所建立的方法对保存的89个禽流感病毒样品进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定、HA、HI)的符合率达100%。用上述建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的4 000多份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率为100%。

主 题 词：禽流感 H5亚型 H7亚型 H9亚型 实时荧光RT PCR 多重实时检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-8721.2006.02.011

馆 藏 号：203116498...