发卡样CTGF特异性RNA干扰重组体的构建及筛选

作     者：主余华 张春清 任万华 马艳丽 赵幼安 ZHU Yu-hua;ZHANG Chun-qing;REN Wan-hua;MA Yan-li;ZHAO You-an

作者机构：山东大学山东省立医院消化内科山东济南250021 山东大学齐鲁医院消化内科山东济南250012 

基　　金：山东省卫生厅青年基金资助课题(2005年第25号) 

出 版 物：《山东大学学报（医学版）》 (Journal of Shandong University:Health Sciences)

年 卷 期：2006年第44卷第4期

页      码：351-356页

摘      要：目的:利用Pgenesil-1质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA表达的质粒,并筛选有效的抑制序列。方法:分别设计3对有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列,经退火成互补双链,再克隆至带有U6启动子的质粒载体Pgenesil-1中,构建重组体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。将构建成功的4组重组体转染HSC-T6 24 h后,通过半定量RT-PCR分析HSC-T6 CTGFmRNA的表达水平,与空白对照及仅加转染试剂组比较分析。结果:CTGF的shR-NA片段被成功克隆到Pgenesil-1质粒载体中,经酶切与测序证实构建成功,转染HSC-T6 24 h后,与空白对照组相比,通过半定量RT-PCR分析发现有两组细胞CTGFmRNA水平明显下降,24 h抑制效率分别为(74±5)%,(P<0.01);(61±3)%,(P<0.05)。转染非特异shRNA组及仅加转染试剂组CTGFmRNA表达水平无明显变化。结论:成功构建了能表达CTGFshRNA的3组重组体,并筛选出能高效抑制CTGF表达的shRNA序列,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了实验基础。

主 题 词：结缔组织生长因子 RNA干扰 短发夹RNA 质粒 肝纤维化 基因表达 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7554.2006.04.007

馆 藏 号：203116519...