采用基因敲除和反义技术抑制酿酒酵母ERG7基因表达

作     者：高丽丽 杨金玲 朱平 

作者机构：天然药物活性物质与功能国家重点实验室卫生部天然药物生物合成重点实验室中国医学科学院北京协和医学院药物研究所北京100050 

基　　金：国家"十二五"科技重大专项"综合性新药研究开发技术大平台"项目(2012ZX09301002) 北京市自然科学基金项目(7122115) 天然药物活性物质与功能国家重点实验室自主课题 

出 版 物：《菌物研究》 (Journal of Fungal Research)

年 卷 期：2013年第11卷第2期

页      码：144-144页

摘      要：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)固有的甲羟戊酸(MVA)/麦角甾醇代谢途径生成的中间体2,3-氧化鲨烯是三萜类化合物的合成前体,以酿酒酵母为底盘细胞通过合成生物学技术组建这些化合物的代谢途径时,需要下调2,3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢流。在酿酒酵母中由羊毛甾醇合酶(ERG7)催化的2,3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点。采用基因敲除和反义RNA 2种技术对ERG7基因的表达进行下调。设计含有与ERG7基因ORF两侧序列同源的长引物,以质粒PUG66为模板进行PCR扩增,构建带有loxP-Marker-loxP的ERG7基因敲除组件,采用LiAc/SS Carrier DNA/PEG方法转化双倍体酿酒酵母INVSc1,通过同源重组的方式获得酿酒酵母ERG7基因单倍体缺失突变株,并对其进行了分子生物学确证。大量培养野生型和突变型菌株,菌体冷干后在碱醇溶液中90℃回流1h,正己烷萃取后旋蒸干溶剂,甲醇溶解残留物麦角甾醇。通过TLC和HPLC方法比较麦角甾醇含量,结果表明:与野生型菌株相比,突变型菌株的麦角甾醇含量明显降低。

主 题 词：酿酒酵母 ERG7基因 基因敲除 反义RNA 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13341/j.jfr.2013.02.004

馆 藏 号：203116543...