重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定

作     者：李军明 林衡 张立超 葛高顺 胡学军 Li Junming;Lin Heng;Zhang Lichao;Ge Gaoshun;Hu Xuejun

作者机构：大连大学医学院辽宁大连116622 大连大学生命科学与技术学院辽宁大连116622 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31070822) 辽宁省教育厅高校科研计划项目(L2010015) 

出 版 物：《重庆医学》 (Chongqing medicine)

年 卷 期：2013年第42卷第28期

页      码：3390-3392页

摘      要：目的构建重组人C反应蛋白(rhCRP)甲醇酵母分泌表达菌株,表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。方法将人工设计合成的rhCRP基因克隆到甲醇酵母表达载体pPICZαA上,经SacⅠ线性化得到重组质粒pPICZαA/rhCRP后转化至甲醇酵母X-33中,利用甲醇诱导进行分泌表达,并用组氨酸标签进行亲和层析纯化rhCRP。采用SDS-PAGE、Western blotting检测表达、纯化的目的蛋白,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和稳定性。结果成功构建人CRP的重组甲醇酵母表达载体pPICZαA/rhCRP,重组酵母菌株成功诱导分泌表达23×103的rhCRP;一步纯化即得纯度为90.42%的目的蛋白,间接ELISA法检测表明,纯化产物rhCRP具有特异的免疫反应性和一定的稳定性。结论利用甲醇酵母表达系统,成功获得了较高纯度的具有免疫反应性的rhCRP,为下一步制备抗人CRP抗体及自主研发人CRP检测试剂提供重要的实验基础。

主 题 词：C反应蛋白质 甲醇酵母 诱导表达 分泌表达 免疫反应性 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-8348.2013.28.022

馆 藏 号：203116559...