重组RNA干扰表达载体的构建与鉴定

作     者：田宇 杜娟 李尚伟 TIAN Yu;DU Juan;LI Shang-wei?

作者机构：贵州大学昆虫研究所贵州山地农业病虫害重点实验室贵州贵阳550025 

基　　金：国家自然科学基金项目(31360443) 贵州大学研究生创新基金(研农2014009) 

出 版 物：《山地农业生物学报》 (Journal of Mountain Agriculture and Biology)

年 卷 期：2015年第34卷第3期

页      码：48-54页

摘      要：干扰(RNA interference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。本研究以稻纵卷叶螟可溶型海藻糖酶基因(Cm Tre1)为靶标,设计RNAi靶位点并将其命名为Cm Tre1*,在其两端分别添加Bam H I与Spe I酶切位点并进行人工合成,然后经双酶切后与p1301植物表达载体连接,构建重组表达载体p1301-Cm Tre1*。PCR、双酶切和测序鉴定结果证明重组表达载体p1301-Cm Tre1*构建成功,并将其成功转入农杆菌LBA4404,构建基因工程菌。用含有p1301-Cm Tre1*质粒的农杆菌LBA4404浸染中花11号水稻的愈伤组织,经过愈伤组织的抗性筛选、分化和植株再生,获得26株阳性转基因植株。用取食非转基因水稻的稻纵卷叶螟作为对照,用实时荧光定量PCR方法分株测定取食转基因水稻稻纵卷叶螟体内Cm Tre1基因的mRNA表达水平,并检测其体内海藻糖酶活性变化。结果显示,相较于对照组,取食转基因水稻稻纵卷叶螟体内Cm Tre1基因表达量下降了44.79%,海藻糖酶活力平均下降了14.94%。研究结果表明转基因水稻的RNA干扰效应相当明显,能对取食其叶片的稻纵卷叶螟Cm Tre1基因起到明显的沉默作用。

主 题 词：RNA干扰 稻纵卷叶螟 海藻糖酶基因 表达载体构建 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2015.03.009

馆 藏 号：203117233...