天蚕素A-蛙皮素杂合肽突变体的构建、表达及其抗菌活性

作     者：冯惟萍 韩跃武 任慧子 陈建国 张庆华 卢天龙 FENG Wei-ping, HAN Yue-wu, REN Hui-zi, et al (Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medicine, Lanzhou University, Lanzhou 730000, China)

作者机构：兰州大学基础医学院生物化学与分子生物学研究所兰州730000 

基　　金：国家"863"计划资助项目(2006AA10A208-1-4) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2008年第21卷第9期

页      码：752-755页

摘      要：目的构建天蚕素A(1～8)-蛙皮素(1～12)杂合基因抗菌肽(CA-MA杂合肽)突变体,在大肠杆菌中融合表达,并进行抗菌活性检测。方法采用PCR体外定点突变技术,设计1对方向相反的引物,其中1个引物引入突变点,应用高保真的PolybestDNA多聚酶进行重组表达质粒pGEX-4T-1-CA-MA的PCR扩增,使CA-MA杂合肽第16位密码子由AGT突变为TGG。将扩增片段自身连接,构建CA-MA杂合肽突变重组表达质粒pGEX-4T-1-W16-CA-MA,转化***21,IPTG诱导表达突变体蛋白W16-CA-MA,并对表达产物进行纯化。分离GST融合蛋白后,进行抗菌活性检测。结果重组突变表达质粒DNA测序结果表明,在预期位点发生了突变;突变蛋白在大肠杆菌中的表达量约占菌体总蛋白的18%;纯化后蛋白纯度可达75%以上,并具有一定的抗菌活性。结论已成功获得了具有抗菌活性的杂合肽突变体W16-CA-MA。

主 题 词：天蚕素A-蛙皮素杂合肽 突变体 融合表达 抗菌活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0703[理学-化学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2008.09.21.fengwp.003

馆 藏 号：203117253...