含人β1转化生长因子短发夹RNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

作     者：马宁 李宏 赵慧 刘畅 杨宇丹 洪敏 MA Ning

作者机构：吉林省长春市解放军第208医院整形烧伤科长春130062 吉林大学基础医学院 

出 版 物：《中华医学美学美容杂志》 (Chinese Journal of Medical Aesthetics and Cosmetology)

年 卷 期：2008年第14卷第6期

页      码：403-406页

摘      要：目的构建含人β1转化生长因子（TGF-β1）短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）的复制缺陷型腺病毒载体。方法通过聚合酶链式反应（PCR）法将带有TGF-β1 shRNA序列构建至U6启动子（U6sh TGF-β1）下游，与T载体连接，将质粒转化入大肠杆菌。将U6sh TGF-β1连到穿梭质粒pDC316上，与腺病毒基因组质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染293T细胞，得到重组腺病毒载体（rAd TGF-β1）。经PCR鉴定正确后，进行扩增、纯化、滴度测定及感染性鉴定。结果PCR法得到目的片段U6sh TGF-β1，经测序，序列与设计方案完全一致。rAd TGF-β1具有良好的感染性，腺病毒滴度可达10^7.3TCID50／ml。双引物PCR法鉴定Ad TGF-β1可扩增出腺病毒E2b区片段及特异性片段U6sh TGF-β1。结论成功构建了能表达TGF-β1 shRNA的重组腺病毒载体rAd TGF-β（A）及对照载体rAd TGF-β1（B），可能为临床应用RNA干涉——新的基因技术防治瘢痕疙瘩提供高效的方法。

主 题 词：β1转化生长因子 腺病毒载体 RNA干扰 瘢痕 基因治疗 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1671-0290.2008.06.014

馆 藏 号：203117308...