百日咳鲍特菌双目标基因荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立及应用

作     者：刘勇 郭丽茹 刘鹏 黄海涛 张颖 高志刚 苏旭 陈锦英 

作者机构：天津市疾病预防控制中心天津300011 

出 版 物：《中国疫苗和免疫》 (Chinese Journal of Vaccines and Immunization)

年 卷 期：2012年第18卷第5期

页      码：447-450页

摘      要：目的建立以百日咳鲍特菌重复插入序列(Insertion Sequences481 and 1002,IS481,IS1002)双目标基因检测为特点的荧光定量聚合酶链反应(Polymease Chain Reaction,PCR),用于检测百日咳鲍特菌核酸,探讨在百日咳鲍特菌诊断中的应用意义。方法针对百日咳鲍特菌的重复IS481及IS1002基因保守区域设计特异性引物、羧基荧光素与小沟结合基团(5-Carboxy Fluorescein-Aminohexyl Amidite-Minor Groove Binder,TaqMan-MGB)荧光探针,做为双目标基因检测、筛选并优化荧光定量PCR反应体系与反应条件,并通过体外克隆技术建立百日咳鲍特菌双目标基因定量分析模型。结果引物与探针的优化浓度分别为600毫摩尔/升(mmol/L)和200mmol/L,与其他呼吸道菌均无交叉反应,具有良好的特异性。应用重组质粒绘制的标准曲线循环阈值(CycleThreshold,Ct)与模板浓度具有良好的线性关系,方法检测灵敏度为102拷贝/微升(Copies/l),标准曲线线性范围为103～107Copies/l。用荧光定量PCR检测50例百日咳病例标本,阳性45例,包括PCR方法检测阴性5份。结论建立的双目标基因实时荧光定量PCR方法特异、敏感、快速,为百日咳鲍特菌的早期快速检测提供了技术支持。

主 题 词：百日咳鲍特菌 双目标基因 荧光定量聚合酶链反应 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

馆 藏 号：203117336...