单核细胞增生李斯特菌荧光定量PCR检测试剂盒的研制

作     者：张丹丹 龙飞 王大鹏 施春雷 史贤明 Zhang Dandan;Long Fei;Wang Dapeng;Shi Chunlei;Shi Xianming

作者机构：上海交通大学农业与生物学院陆伯勋食品安全研究中心中美食品安全联合研究中心上海200240 

基　　金：“十一五”国家科技支撑计划项目(2009BADB9B01) 科技部国际合作项目(2011DFA31220,2009DFA31770) 上海市科学仪器及化学试剂项目(10142201300,09142201200) 

出 版 物：《中国食品学报》 (Journal of Chinese Institute Of Food Science and Technology)

年 卷 期：2011年第11卷第3期

页      码：138-143页

摘      要：目的:建立一种用于单核细胞增生李斯特菌快速检测的荧光定量PCR试剂盒。方法:根据本课题组前期工作基础,针对单核细胞增生李斯特菌hly基因序列设计TaqMan探针和引物,建立荧光定量PCR检测方法,将反应试剂组装成试剂盒,并对该试剂盒的各项参数进行评价。结果:特异性试验表明,组装的试剂盒对8株单核细胞增生李斯特菌标准菌株的检测均呈阳性反应,对6株其它种的李斯特菌及13株食品(环境)中常见的非李斯特污染菌(如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌)呈阴性反应。该试剂盒的基因组DNA检测灵敏度为3.94fg/反应(约合1.34CFU/反应)。该试剂盒批内平均变异系数为2.2%,批间变异系数为1.9%,具有良好的重复性;同时稳定性强,反复冻融处理对其无明显影响;可在-20℃下避光保存1年。结论:该试剂盒具有特异性强、灵敏度高、重复性好、稳定性强等优点,可应用于单核细胞增生李斯特菌的快速检测。

主 题 词：单核细胞增生李斯特菌 荧光定量PCR 检测试剂盒 

学科分类：09[农学] 0903[农学-动物生产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-7848.2011.03.023

馆 藏 号：203117339...