基于RNAi的家蝇β-葡萄糖苷酶功能分析

作     者：吴书东 彭建 国果 修江帆 尚小丽 WU Shudong;PENG Jian;GUO Guo;XIU Jiangfan;SHANG Xiaoli

作者机构：贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 

基　　金：贵州医科大学学术新苗项目(19NSP062) 贵州省科技计划项目[黔科合基础-ZK(2022)一般377] 国家自然科学基金项目(82002180) 贵州省高等学校特色重点实验室项目[黔教合KY字(2020)012] 

出 版 物：《贵州农业科学》 (Guizhou Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第51卷第1期

页      码：51-58页

摘      要：【目的】探明家蝇β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BG)在家蝇体内的功能,为深入研究家蝇BG在木质纤维素降解中的作用奠定基础。【方法】针对家蝇BG基因的功能结构域设计3对特异性引物用于dsRNA的体外合成,通过显微注射的方法将dsRNA导入家蝇2龄幼虫,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测抑制效率,分别以滤纸、水杨苷、微晶纤维素及羧甲基纤维素钠为底物检测BG基因的干扰对家蝇消化道粗酶液滤纸酶活性、BG、CBH(Cellobiohydrolase)及EG(Endoglucanase)酶活性的影响。【结果】在注射dsRNA后18 h家蝇幼虫消化道中BG基因的表达量下降62%且此时为最佳干扰时间点,在BG基因表达受到抑制后家蝇消化道的滤纸酶、BG酶活性显著降低,且时间变化趋势与上述干扰条件下BG基因表达量变化一致,均在干扰后18 h酶活性达最低,但CBH及EG酶活性较对照组无显著变化。【结论】RNA干扰技术能够有效抑制家蝇BG基因的表达,推测家蝇BG具有滤纸酶和BG酶活性。

主 题 词：家蝇 β-葡萄糖苷酶 RNA干扰 纤维素酶活性 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-3601.2023.01.008

馆 藏 号：203117749...