靶向X区的siRNA抑制乙型肝炎病毒基因的表达和复制

作     者：刘家云 郝晓柯 李庆霞 黄红艳 马龙洋 温伟红 贾林涛 杨安钢 LIU Jia-yun;HAO Xiao-ke;LI Qing-xia;HUANG Hong-yan;MA Long-yang;WEN Wei-hong;JIA Lin-tao;YANG An-gang

作者机构：第四军医大学第一附属医院检验科西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 第四军医大学免疫学教研室 

基　　金：国家973重点基础研究发展规划基金项目(2004CB518805) 国家863高技术研究发展计划基金项目(2004AA217071) 国家自然科学基金资助项目(30500433) 

出 版 物：《中华检验医学杂志》 (Chinese Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2006年第29卷第12期

页      码：1084-1088页

摘      要：目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)X基因的siRNA表达载体,观察其对HBV基因表达和复制的影响。方法设计并合成针对HBVX区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG22·2·15细胞,潮霉素抗性筛选获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶基因mRNA的抑制效果,荧光定量PCR检测HBVDNA。结果成功构建了针对HBVX基因的siRNA表达载体pSUPER-X1和pSUPER-X2,两种siRNA均能明显抑制HepG22·2·15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为97%和88%,RT-PCR结果显示HBV的mRNA表达降低,荧光定量PCR结果证实siRNA能降低HBVDNA拷贝数2个数量级。结论载体产生的针对HBVX基因的siRNA能高效、特异地抑制HBV基因的表达和复制。

主 题 词：肝炎病毒 乙型 RNA 小分子干扰 转染 聚合酶链反应 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j:issn:1009-9158.2006.12.008

馆 藏 号：203117819...