人前脑啡肽原基因真核表达载体的构建

作     者：马艳丽 赵青赞 曹靖 臧卫东 陈雪梅 MA Yanli;ZHAO Qingzan;CAO Jing;ZANG Weidong;CHEN Xuemei

作者机构：郑州大学第一附属医院麻醉科郑州450052 郑州大学医学院解剖教研室 

出 版 物：《中原医刊》 (Central Plains Medical Journal)

年 卷 期：2007年第34卷第15期

页      码：3-4页

摘      要：目的 构建人前脑啡肽原基因真核表达载体，为进一步研究内源性脑啡肽的镇痛活性及相关药物研发奠定基础。方法 取新鲜的人脑颞叶皮质组织，用提取RNA的试剂盒提取总RNA，逆转录成cDNA。设计两对引物，用巢式PCR的方法获得人脑啡肽原基因，并将其插入到克隆载体pMD18-T中，克隆扩增。双酶切真核表达质粒pCDNA3．1（＋）及T载体中的目的片段，胶回收重组构建成pCDNA3．1（＋）-PENK表达载体。最后限制性酶切鉴定该表达载体。结果 采用巢式RT—PCR技术可以获得人前脑啡肽原基因，经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列。凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pCDNA3.1（＋）内。结论 成功构建了pCDNA3．1（＋）-PENK真核表达质粒。可作为疼痛基因治疗实验研究的有力工具。

主 题 词：镇痛 脑啡肽 pCDNA3.1(+)质粒 

学科分类：1006[医学-中西医结合类] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 100602[100602] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1674-4756.2007.15.002

馆 藏 号：203117836...