地鼠多瘤病毒PCR检测方法的建立

作     者：叶琳 张鹏艳 曾献武 郑庆纹 张雪梅 姚亚夫 YE Lin;ZHANG Peng-yan;ZENG Xian-wu;ZHENG Qing-wen;ZHANG Xue-mei;YAO Ya-fu

作者机构：成都生物制品研究所有限责任公司生物技术室610023 病毒性疫苗研究室 病毒性疫苗一室 

出 版 物：《国际生物制品学杂志》 (International Journal of Biologicals)

年 卷 期：2012年第35卷第3期

页      码：113-117页

摘      要：目的建立地鼠多瘤病毒（hamster polyomavirus，HaPyV）PCR检测方法，并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测。方法设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物，以含HaPyV VP1片段的质粒PMDl9T—HaPyV688为模板进行PCR扩增并测序确认扩增产物。以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增，并对扩增产物进行斑点杂交鉴定以验证PCR方法的特异性。将定量的质粒PMD19T-HaPyV68810倍系列稀释后进行PCR敏感性检测。以小鼠多瘤病毒（murinepolyomavirus，MuPyV）检验PCR法对质粒DNA和病毒DNA检测的一致性。应用建立的方法对生产用地鼠肾细胞悬液进行HaPyVDNA检测。结果仅含有质粒PMDl9T—HaPyV688和MuPyVDNA的样品能够扩增出600bp的片段，经斑点杂交及测序证明其分别为HaPyV和MuPyV的VPl特异基因片段。PCR所能检出的PMD19T—HaPyV688和MuPyV的最少DNA拷贝数分别为5300和590。7个亚批生产用地鼠肾细胞悬液的HaPyV检测结果均为阴性。结论建立的PCR方法具有较高的敏感性和特异性，可用于生产用地鼠肾细胞HaPyV感染的检测。

主 题 词：多瘤病毒属 聚合酶链反应 敏感性与特异性 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-4211.2012.03.001

馆 藏 号：203118048...