蜱传脑炎病毒衣壳蛋白的可溶性表达、纯化及初步应用

作     者：聂倩文 张婷婷 常东英 刘君 陈子杨 常军亮 NIE Qian-wen;ZHANG Ting-ting;CHANG Dong-ying;LIU Jun;CHEN Zi-yang;CHANG Jun-liang

作者机构：长春生物制品研究所有限责任公司生物技术研究室吉林长春13001 长春理工大学生命科学技术学院吉林长春130022 

基　　金：吉林省省级医药健康产业发展专项基金项目(20170311010YY) 

出 版 物：《微生物学免疫学进展》 (Progress In Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2022年第50卷第6期

页      码：1-6页

摘      要：目的构建蜱传脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)衣壳蛋白(capsid protein,C)原核表达质粒,并以其表达、纯化的C蛋白作为抗原检测临床血清,评价其在蜱传脑炎(tick-borne encephalitis,TBE)临床血清学诊断中的应用。方法登录Genbank对TBEV“森张”株C蛋白基因序列设计扩增引物,以PCR扩增C蛋白目的基因并克隆至原核表达载体pET-32a(+)后,构建重组表达质粒pET-32a-C。再将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,采用IPTG诱导剂诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化后,Western blot检测其反应原性;以制备的C蛋白作为包被抗原,用间接ELISA分别检测20份TBEV IgG抗体阳性临床血清、10份流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)阳性临床血清及20份阴性血清,并计算检测的特异性和敏感度。结果重组表达质粒pET-32a-C序列测定正确;经12%SDS-PAGE电泳分析,重组C蛋白主要为可溶性蛋白表达;纯化后蛋白纯度>90%,经Western blot鉴定可与TBEV全病毒血清抗体特异性结合。间接ELISA定性检测临床TBE血清,其特异性与敏感度分别为96.7%和95.0%。结论成功构建了TBEV衣壳蛋白重组表达质粒pET-32a-C并在大肠埃希菌中实现诱导表达;表达的重组C蛋白可与TBEV阳性血清特异性结合,在临床疾病的血清学诊断上具有一定的应用价值。

主 题 词：蜱传脑炎病毒 乙型脑炎病毒 衣壳蛋白 原核表达 纯化 酶联免疫吸附试验 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.13309/j.cnki.pmi.2022.06.001

馆 藏 号：203118056...