定量测定IL-4和IFN-γ mRNA的RT-竞争PCR法及其应用

作     者：朱晴晖 张洪熹 孙碧雄 帅月敏 章谷生 

作者机构：上海纺织第一医院上海市呼吸特色专科免疫学分子生物学实验室200060 上海纺织第一医院呼吸内科200060 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2000年第20卷第6期

页      码：590-593页

摘      要：目的　建立测定IFN γmRNA和IL 4mRNA和RT 竞争PCR方法 ,探讨体外诱生条件并作临床初步应用。方法　用自行设计和制备的IFN γcDNA和IL 4cDNA竞争模板 ,作RT 竞争PCR ,对健康人经PMA和calciumionophore(钙离子载体 )诱导的PBMC、11例健康人和 13例哮喘患者PBMC作IFN γmRNA和IL 4mRNA定量测定。结果　在建立了准确的定量测定mRNA方法的基础上 ,确认在calciumionophore 2 .0 μmol/L浓度时 ,用PMA 10 0ng/ml诱导 6h或PMA 80ng/ml诱导 7h ,IFN γmRNA或IL 4mRNA表达分别达最高水平 ,两种细胞因子mRNA在健康人PBMC中不表达 ,而在 10 /13例和 11/ 13例哮喘患者中分别呈不同程度的表达 ,其中IL 4mRNA表达水平高于IFN γmRNA。结论用自行设计和制备的竞争模板经RT 竞争PCR法可对细胞内IFN γmRNA和IL 4mRNA作较准确的定量测定 ,方法简便且敏感 ;健康人PBMC需经一定条件刺激方可表达两种细胞因子mRNA ;多数哮喘患者PBMC不经刺激即可表达两种细胞因子mRNA ,IL 4mRNA表达水平高于IFN γmRNA ,提示本法可用于研究细胞因子基因表达和哮喘等患者细胞因子变化动态。

主 题 词：白细胞介素4 γ干扰素 mRNA RT-PCR 竞争模板 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j:issn:0254-5101.2000.06.041

馆 藏 号：203118098...