炭疽芽孢杆菌PA-LF1融合蛋白的原核表达及其反应原性研究

作     者：吕双飞 马勋 王静 孔翠莲 寇丽君 刘彩霞 史唯地 康立超 任慧杰 LYU Shuangfei;MA Xun;WANG Jing;KONG Cuilian;KOU Lijun;LIU Caixia;SHI Weidi;KANG Lichao;REN Huijie

作者机构：石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆农垦科学院农业质量标准与检测技术研究所石河子832000 

基　　金：国家自然科学基金(31860712、32160834) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第50卷第2期

页      码：674-683页

摘      要：【目的】构建炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202 PA-LF 1融合基因表达载体并对其进行原核表达和反应原性检测,为炭疽亚单位疫苗制备、炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供依据。【方法】根据GenBank中登录的炭疽芽孢杆菌PA和LF基因序列设计2对引物,利用PCR方法从炭疽芽孢杆菌弱毒株C40-202中分别扩增出PA和LF 1基因片段,经XhoⅠ限制性内切酶消化后,通过黏性末端进行连接,获得PA-LF 1融合基因片段,利用SWISS-MODEL分析软件分别对PA、LF1和PA-LF1融合蛋白进行三级结构预测;将融合基因片段克隆至pET32a(+)质粒中,构建重组质粒pET32a-PA-LF1,并将重组质粒pET32a-PA-LF1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白表达,Western blotting鉴定融合蛋白并分析其反应原性。【结果】从炭疽芽孢杆菌弱毒C40-202株成功扩增出PA、LF 1和PA-LF 1融合基因;成功构建了炭疽芽孢杆菌PA-LF 1融合基因表达质粒pET32a-PA-LF1,融合蛋白三级结构预测可折叠为正确的空间构象;构建的重组质粒经诱导表达、纯化和SDS-PAGE,获得分子质量为96 ku的融合蛋白,以包涵体形式表达;经Western blotting验证,纯化后的重组蛋白与经Ⅱ号炭疽芽孢苗免疫后的绵羊血清发生特异性结合,表明其具有良好的反应原性。【结论】PA-LF1融合蛋白具有良好的反应原性,可为炭疽诊断和疫苗免疫效果检测提供理论依据,同时也可作为一种炭疽亚单位疫苗的候选组分。

主 题 词：炭疽芽孢杆菌 PA-LF 1基因 克隆 原核表达 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.02.025

馆 藏 号：203118180...