Galectin-3抑制剂体外筛选方法的建立及评价

作     者：马春晓 邢肖伟 侯少聪 何淑旺 颜世强 李平平 MA Chun-xiao;XING Xiao-wei;HOU Shao-cong;HE Shu-wang;YAN Shi-qiang;LI Ping-ping

作者机构：中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京100050 山东达因海洋生物制药有限公司山东威海264333 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81770800) 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2021-I2M-1-016) 中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费(2018RC350004) 北京高校卓越青年科学家计划项目(BJJWZYJH01201910023028) 

出 版 物：《药学学报》 (Acta Pharmaceutica Sinica)

年 卷 期：2023年第58卷第1期

页      码：156-161页

摘      要：半乳糖凝集素-3 (galectin-3, Gal-3)属于β半乳糖苷酶结合凝集素家族,具有特异性结合半乳糖的特性。通过C端糖蛋白结合区(carbohydrate recognition domain, CRD), Gal-3可结合糖基化胰岛素受体(insulin receptor,IR)的半乳糖苷链,从而抑制IR信号通路,导致胰岛素抵抗,被视为治疗胰岛素抵抗和2型糖尿病的潜在药物作用靶点。本研究根据Gal-3结合糖基化蛋白半乳糖苷链的特性,设计了一种简便的Gal-3抑制剂筛选模型。在大肠杆菌表达Gal-3蛋白,经纯化后,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)修饰,获得Gal-3-FITC。Gal-3-FITC自发绿色荧光,与表面表达有大量糖蛋白的人胰腺癌细胞(PANC-1)孵育后, PANC-1细胞带有荧光信号。若待测化合物有Gal-3抑制活性,则该化合物可降低Gal-3-FITC与细胞的结合,从而降低PANC-1细胞荧光信号。通过荧光信号变化可评价Gal-3抑制剂的抑制强度。进一步研究表明,该筛选模型简易稳定,具有良好重复性, Z’因子在0.7和0.85之间。本研究采用FITC标记Gal-3的方式在PANC-1细胞上用荧光强度反映Gal-3和糖蛋白的结合水平,构建了Gal-3抑制剂的高通量筛选模型。

主 题 词：半乳糖凝集素-3 糖基化 筛选 慢性炎症 异硫氰酸荧光素 

学科分类：1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100706[100706] 100602[100602] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16438/j.0513-4870.2022-0342

馆 藏 号：203118199...